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液(ye)(ye)相色谱(pu)仪6大检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)是什么?检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)的(de)作用是将色谱(pu)柱(zhu)流出物(wu)中样品组(zu)成(cheng)和含量(liang)的(de)变化(hua)(hua)转化(hua)(hua)为可供检测(ce)(ce)(ce)(ce)的(de)信(xin)号,从而(er)定性定量(liang)分(fen)析待测(ce)(ce)(ce)(ce)组(zu)分(fen)。需要掌握不同检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)的(de)原理。液(ye)(ye)相色谱(pu)仪常用的(de)检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)包括紫外检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)、荧光(guang)检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)、示(shi)差折(zhe)光(guang)检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)、蒸(zheng)发(fa)光(guang)散射(she)检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)、化(hua)(hua)学发(fa)光(guang)检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)、质谱(pu)检测(ce)(ce)(ce)(ce)器(qi)(qi)等。
紫(zi)外检测器(UVD)
是目前液(ye)相(xiang)色谱中应用最广泛的(de)(de)检(jian)测器。自然界中大部分(fen)有(you)机物(wu)和部分(fen)无机物(wu)都具有(you)紫(zi)(zi)(zi)外(wai)(wai)吸收(shou)能力,UV检(jian)测器根(gen)据化(hua)合(he)物(wu)对紫(zi)(zi)(zi)外(wai)(wai)光(guang)的(de)(de)吸收(shou)能力,通(tong)过二极管(guan)将光(guang)信(xin)(xin)(xin)号转变为电(dian)信(xin)(xin)(xin)号,从而进行分(fen)析。它有(you)两(liang)个流通(tong)池(chi),一(yi)个作(zuo)参比,一(yi)个作(zuo)测量用,光(guang)源发出(chu)(chu)的(de)(de)紫(zi)(zi)(zi)外(wai)(wai)光(guang)照射(she)到(dao)流通(tong)池(chi)上,若两(liang)流通(tong)池(chi)都通(tong)过纯(chun)的(de)(de)均匀溶(rong)剂,则(ze)它们在紫(zi)(zi)(zi)外(wai)(wai)波(bo)长下几乎无吸收(shou),光(guang)电(dian)管(guan)上接受到(dao)的(de)(de)辐射(she)强度相(xiang)等(deng),无信(xin)(xin)(xin)号输出(chu)(chu)。当组分(fen)进入测量池(chi)时,吸收(shou)一(yi)定(ding)的(de)(de)紫(zi)(zi)(zi)外(wai)(wai)光(guang),使两(liang)光(guang)电(dian)管(guan)接受到(dao)的(de)(de)辐射(she)强度不等(deng),这时有(you)信(xin)(xin)(xin)号输出(chu)(chu),输出(chu)(chu)信(xin)(xin)(xin)号大小与组分(fen)浓度有(you)关。
使(shi)用过紫外检(jian)(jian)(jian)(jian)测器的(de)(de)(de)(de)(de)(de)人应该(gai)都会发(fa)现,很多(duo)标准方法中都是(shi)(shi)(shi)(shi)以254nm作为(wei)检(jian)(jian)(jian)(jian)测波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de),那为(wei)什(shen)么是(shi)(shi)(shi)(shi)这(zhei)个波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)呢(ni)?因(yin)为(wei)在液相(xiang)色谱检(jian)(jian)(jian)(jian)测器的(de)(de)(de)(de)(de)(de)发(fa)展过程(cheng)中使(shi)用最(zui)(zui)久的(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)(shi)(shi)(shi)低压(ya)汞灯,而汞的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)(zui)大(da)发(fa)射波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)是(shi)(shi)(shi)(shi)253.7nm,也就是(shi)(shi)(shi)(shi)说在254nm波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)下(xia),灯能量最(zui)(zui)高,检(jian)(jian)(jian)(jian)测灵敏度最(zui)(zui)好。但现阶段,很多(duo)紫外检(jian)(jian)(jian)(jian)测器采(cai)用的(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)(shi)(shi)(shi)氘灯,这(zhei)时候(hou)254nm的(de)(de)(de)(de)(de)(de)检(jian)(jian)(jian)(jian)测波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)其实(shi)意义不大(da),氘灯的(de)(de)(de)(de)(de)(de)使(shi)用范(fan)(fan)围一(yi)般是(shi)(shi)(shi)(shi)190-800nm,需要(yao)考(kao)虑化(hua)合物(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)(zui)大(da)吸收波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)并且(qie)避开流(liu)(liu)动相(xiang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)吸收干扰来选择(ze)合适的(de)(de)(de)(de)(de)(de)检(jian)(jian)(jian)(jian)测波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)。这(zhei)就限制了(le)其流(liu)(liu)动相(xiang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)选择(ze)范(fan)(fan)围,一(yi)般检(jian)(jian)(jian)(jian)测波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)要(yao)避开溶剂截止波(bo)长(zhang)(zhang)(zhang)20nm以上。
荧光检测器(FLD)
是(shi)目前液相色谱灵敏度最高的(de)检(jian)测器,应(ying)用广(guang)泛,选(xuan)择(ze)性强。适用于能(neng)激发(fa)荧(ying)(ying)光的(de)化合(he)物(wu)(wu)。很多与生命科学有关的(de)物(wu)(wu)质,如氨基(ji)(ji)酸(suan)、胺类、维生素、甾族化合(he)物(wu)(wu)及某些代谢药物(wu)(wu)都(dou)可(ke)以用荧(ying)(ying)光法检(jian)测。荧(ying)(ying)光检(jian)测器在(zai)生物(wu)(wu)样品痕量分析中具有重要(yao)作(zuo)用,尤其在(zai)用荧(ying)(ying)光衍生后(hou),可(ke)以检(jian)测很微量的(de)氨基(ji)(ji)酸(suan)和肽。在(zai)实验过程中需要(yao)严格脱气,因为系统中残留的(de)氧气会(hui)引(yin)发(fa)荧(ying)(ying)光淬(cui)灭反应(ying),造(zao)成峰(feng)面积大幅下(xia)降甚(shen)至不出峰(feng)。
示差(cha)折光检测(ce)器(RID)
是(shi)一种通(tong)(tong)用(yong)(yong)型检测(ce)器(qi),利(li)用(yong)(yong)物质的(de)折光(guang)(guang)效应(ying),对(dui)所(suo)有物质均有响应(ying),只(zhi)(zhi)要被测(ce)组分与洗脱液的(de)折光(guang)(guang)指数(shu)有差(cha)别就可使用(yong)(yong)。生命(ming)科学中(zhong)常(chang)遇(yu)到各(ge)类糖类化合物、脂肪烷(wan)烃等,没有紫外吸收,一般常(chang)用(yong)(yong)示差(cha)折光(guang)(guang)检测(ce)器(qi)。它的(de)通(tong)(tong)用(yong)(yong)性比UVD广,但灵敏(min)度(du)(du)要低,对(dui)温度(du)(du)变化敏(min)感,是(shi)所(suo)有检测(ce)器(qi)中(zhong)对(dui)温度(du)(du)要求最高(gao)的(de)。另外,不同的(de)流(liu)动(dong)相比例,其密度(du)(du)或(huo)者折光(guang)(guang)系数(shu)不同,如(ru)果流(liu)动(dong)相比例发生改变,则会引(yin)起基(ji)线的(de)持(chi)续变化,因(yin)此(ci)示差(cha)折光(guang)(guang)检测(ce)器(qi)只(zhi)(zhi)能采用(yong)(yong)等度(du)(du)洗脱,不能采用(yong)(yong)梯(ti)度(du)(du)洗脱,这(zhei)也限制(zhi)了(le)它的(de)使用(yong)(yong)。
蒸(zheng)发光(guang)散射检测器(qi)(ELSD)
也是一种通(tong)用(yong)型的检测器(qi),原理是利用(yong)光散(san)射效应(ying)(ying),可检测挥发性低于流动相的任何样品(pin),通(tong)过雾(wu)化(hua)器(qi)去(qu)除溶剂,让(rang)化(hua)合(he)(he)物形成悬(xuan)浮颗粒,从而形成散(san)射效应(ying)(ying)。ELSD灵敏(min)度比RID高,对温度变化(hua)不敏(min)感,基线稳定,可用(yong)于梯度洗(xi)脱,并(bing)且(qie)可在(zai)没有标准品(pin)和(he)化(hua)合(he)(he)物结构参数未(wei)知的情况下检测未(wei)知化(hua)合(he)(he)物,但不能(neng)使(shi)用(yong)不挥发的盐类溶剂,而要用(yong)醋酸铵(an)之类的挥发性缓(huan)冲盐来代替(ti)。现(xian)在(zai)ELSD已被广泛应(ying)(ying)用(yong)于碳水化(hua)合(he)(he)物、类脂(zhi)、脂(zhi)肪酸和(he)氨(an)基酸、药物以及聚合(he)(he)物等的检测。
化学发光检测(ce)器(CD)
化(hua)学(xue)发(fa)(fa)光(guang)检测(ce)器(qi)是近年来(lai)发(fa)(fa)展起来(lai)的(de)一(yi)种快速、灵敏的(de)新型检测(ce)器(qi),因其(qi)设备(bei)简单、价廉、线(xian)性(xing)范围宽(kuan)等优点。其(qi)原理是基于某些物(wu)(wu)(wu)质在常温下(xia)进行化(hua)学(xue)反(fan)应(ying),生(sheng)成处于激发(fa)(fa)态(tai)势反(fan)应(ying)中(zhong)间体或(huo)反(fan)应(ying)产物(wu)(wu)(wu),当它们从(cong)激发(fa)(fa)态(tai)返(fan)回基态(tai)时,就(jiu)发(fa)(fa)射出光(guang)子。由于物(wu)(wu)(wu)质激发(fa)(fa)态(tai)的(de)能量是来(lai)自化(hua)学(xue)反(fan)应(ying),故叫作化(hua)学(xue)发(fa)(fa)光(guang)。当分离组分从(cong)色谱柱中(zhong)洗脱出来(lai)后,立即与适当的(de)化(hua)学(xue)发(fa)(fa)光(guang)试(shi)剂(ji)混(hun)合,引起化(hua)学(xue)反(fan)应(ying),导致(zhi)发(fa)(fa)光(guang)物(wu)(wu)(wu)质产生(sheng)辐射,其(qi)光(guang)强度与该物(wu)(wu)(wu)质的(de)浓度成正比。该检测(ce)器(qi)不需要(yao)(yao)光(guang)源,也不需要(yao)(yao)复杂的(de)光(guang)学(xue)系统,只要(yao)(yao)有恒流泵(beng)(beng),将化(hua)学(xue)发(fa)(fa)光(guang)试(shi)剂(ji)以一(yi)定的(de)流速泵(beng)(beng)入(ru)混(hun)合器(qi)中(zhong),使之(zhi)与柱流出物(wu)(wu)(wu)迅速而又均匀地混(hun)合产生(sheng)化(hua)学(xue)发(fa)(fa)光(guang),通(tong)过光(guang)电(dian)倍增管将光(guang)信(xin)号(hao)变成电(dian)信(xin)号(hao),就(jiu)可进行检测(ce)。这种检测(ce)器(qi)的(de)最小(xiao)检出量可10-12g。
质谱检测(ce)器(MSD)
也是一(yi)种(zhong)通(tong)用(yong)(yong)型检(jian)测(ce)器(qi),在(zai)灵敏度(du)、选择性(xing)(xing)、通(tong)用(yong)(yong)性(xing)(xing)及化(hua)合物的(de)(de)分(fen)子量和结构信息的(de)(de)提供(gong)等方面都有突出的(de)(de)优点(dian)。但它(ta)(ta)的(de)(de)昂贵操作费(fei)用(yong)(yong)和复杂性(xing)(xing)在(zai)一(yi)定程度(du)上限制了它(ta)(ta)的(de)(de)推广应用(yong)(yong)。理解了这些检(jian)测(ce)器(qi)的(de)(de)原理可以帮助我(wo)们在(zai)实验中更(geng)好地选择和使用(yong)(yong)检(jian)测(ce)器(qi),更(geng)高效率(lv)地完成检(jian)测(ce)任务。
以上就是小编(bian)为(wei)大家(jia)带(dai)来(lai)的解析,看(kan)完这篇文章大家(jia)是不是对(dui)液相(xiang)色谱仪(yi)又有(you)了进(jin)一步的了解?